lunes, 30 de junio de 2008

PERFIL LIPIDICO

PERFIL LIPIDICO

En la realización de un perfil lipídico se contemplan los siguientes parámetros:

1) Lípidos totales.
2) Triglicéridos.
3) Colesterol.
4) Fosfolípidos.
5) Electroforesis de lipoproteínas.

Métodos de determinación de Lípidos Totales

Los lípidos séricos totales incluyen triglicéridos, fosfolípidos, colesterol y sus esteres, ácidos grasos libre, glicolípidos (cerebrósidos), acetalfosfátidos (plamalógenos, ácidos fosfatídicos, alcoholes elevados peso molecular, carotenoides, hormonas esteroideas y las vitaminas A, D, E y K. Existen diversos procedimientos para la determinación de lípidos totales en el suero, sin embargo hasta ahora no se ha logrado un método simple y confiable. En general, se considera que las únicas técnicas cuantitativas directas que existen actualmente son las gravimétricas. Sin embargo se usa ampliamente una serie de procedimientos los cuales requieren separación y extracción de los lípidos.

TRIGLICERIDOS Procedimiento No. CR 315.
Para la determinación colorimétrica cuantitativa enzimática de Triglicéridos en suero o plasma.

Agente e Diagnóstico.
RESUMEN Y PRINCIPIO


Para establecer el diagnóstico de hiperlipoproteinemia primaria o secundaria, es muy útil la cuantificación de triglicéridos en conjunto con otros lípidos, También es útil para dar seguimiento a la diabetes mellitas, nefrosis, obstrucción biliar y varias anormalidades metabólicas que resultan de disturbios endocrinos.

El glicerol y los ácidos grasos se forman en una primera etapa por la acción de la lipasa sobre los triglicéridos.
El glicerol se fosforila por la adenosin-5-trifosfato (ATP) para producir glicerol-3-fosfato (G-3-P) y ATP para producir G-3-P y adenosin 5- difosfato (ADP) en una reacción catalizada por la glicerol-kinasa (GK).


GK
Glicerol + ATP ----- G 3-P + ADP

La G-3-P es oxidada por la gliceril fosfato oxidasa (GPO) produciendo deshidroxiacetona (DAP) y peróxido de hidrógeno.

G 3 P + o2 ----- DAP + H2O2
4. Los peróxidos reaccionan con 4- aminoantipirina y 4- clorofenol bajo la influencia catalítica de la proxidasa (POD) para formar quinoneimina.


2H2O2 + 4-aminopirina --- quinoneimina + HCL + 4H2O


El factor aclarador lipémico (LCF) es una mezcla de aditivos especialmente diseñado por Biochemical Trade dentro del reactivo de triglicéridos para ayudar a minimizar las interferencias debidas a la lipemia.


Procedimiento Manual


Pipetee en las celdillas los siguientes volúmenes (ml) y mezcle bien.




Reactivo Blanco Estándar (S) Muestra (U)
Reactivo 1 1 1
Estándar 0.01
Muestra 0.01


Nota: Los volúmenes pueden incrementarse si el instrumento requiere mas de 1 ml

Incube todas las celdillas por 5 minutos a 37 ºC o a temperatura ambiente por 10 minutos.
Lea S y U contra Reactivo Blanco a 500 nm antes de 15 minutos.


CALCULOS

Triglicéridos séricos (mg/dl) = AU/ AS * 200

Donde AU Y AS son los valores de la muestra y del estándar respectivamente, 200 es la concentración del estándar (mg/dl)

Abs muestra: 0.157
Abs estándar: 0.280

Tg= 0.157/ 0.280*200
Concentración de Triglicéridos= 112, 14 mg/dl





VALORES ESPERADOS

30-150 mg/dl

Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores ya que existen diferencias en los instrumentos, laboratorios y en la población local.

COLESTEROL TOTAL ENZIMATICO

(Con reactivos para HDL-Colesterol) para la determinación de Colesterol Total y HDL-Colesterol.



Aunque hoy en día la palabra 'colesterol' está llena de connotaciones negativas, asociada a una mala alimentación, a problemas cardiovasculares y obesidad, en realidad se trata de un elemento necesario para nuestro organismo. Lo importante es conocer qué es, cómo funciona y cuándo es perjudicial para la salud.
El colesterol no es otra cosa que un tipo de grasa, un lípido concretamente, que participa en muchos procesos fisiológicos importantes como el celular, digestivo y en la sintetización de hormonas, entre otras funciones.
Nuestro hígado es capaz de producir el colesterol necesario para el organismo. Sin embargo, a través de la alimentación, podemos recibir una cantidad adicional de esta sustancia que, en muchas ocasiones, es perjudicial para la salud, sobre todo para el corazón. El origen de su aumento en sangre viene derivado, principalmente, del incremento de las grasas insaturadas en la dieta, procedentes de alimentos con materia grasa.
Colesterol 'bueno' y colesterol 'malo'Con esta sencilla dicotomía, muchos médicos del Primer Mundo, donde las enfermedades cardiovasculares son una de las causas principales de mortalidad entre la población adulta, intentan concienciar a sus pacientes de los riesgos que para la salud comporta una alimentación poco equilibrada y rica en grasas.
Para que el colesterol llegue hasta las células, antes requiere un transporte a través del riego sanguíneo. Para ello, existen dos lipoproteínas, la LDL, de baja densidad, asociada al 'colesterol malo', y la HDL, o de alta densidad, que se identifica con el 'colesterol bueno'.
El problema del colesterol 'malo' o LDL es que, en exceso, se acumula en las arterias y dificulta el tránsito de oxígeno a través de la sangre. Y sin oxígeno, el corazón y el cerebro no pueden funcionan correctamente. De ahí que la mayoría de ataques al corazón e infartos cerebrales estén ligados a este tipo de circunstancias.
La acumulación de estas grasas en los vasos sanguíneos se denomina ateroesclerosis. Aparte de los riesgos de infarto, existen otras patologías cardiovasculares graves ligadas al exceso de colesterol 'malo' como son las trombosis, la angina de pecho o la ateriopatía periférica. Los desarreglos de tiroides pueden también producir problemas de colesterol que no derivan directamente de una mala alimentación.
Por su parte, el colesterol 'bueno', o HDL, no sólo es necesario para el organismo, sino que es recomendable aumentar sus cantidades en sangre cuando existe riesgo de aterosclerosis, porque ayuda a sintetizar el colesterol 'malo' que se acumula las paredes de las arterias.

Principios del método

La determinación de Colesterol Total está basada en el procedimiento enzimático descrito por Allain, donde la colesterol-esterasa (CE) hidroliza los estéres de colesterol a colesterol libre y ácidos grasos. (4). En presencia de oxígeno, el colesterol libre es oxidado por la colesterol oxidasa (CO) a cholest-4-en-3-one y peróxido de hidrógeno. Cuando el fenol está oxidativamente acoplado con 4-aminoantipirina en la presencia de peroxidad (HPO) y, peróxido de hidrógeno se produce un cromóforo de quinoneimina. La intensidad del color producido es proporcional a la concentración de colesterol y se mide colorimetricamente a/ o cerca de 500 nm.

CE
Esteres de Colesterol --- Colesterol + Ac. grasos

Co
Colesterol+ O2 ---- Colest-4-en-3-one +H2=2


HPO
2H2o2 + 4 –aminoantipirina + fenol ----------- quinonenica + 4 H2O

La separación del HDL- Colesterol, está basada en la selectividad de los iones fosfotungstico y magnesio para precipitar todas las lipoproteínas con excepción del HDL-colesterol contenido en el líquido sobrenadante, se determina con el mismo método el colesterol total.




HDL-Precipitante:


Es una mezcla de ácido fosfotungstico con hidróxido de sodio y cloruro de magnesio con un surfactante. Guardar refrigerado a 4-8ºC o a temperatura ambiente (25ºC).

MUESTRA:

Las muestras mejor recomendadas para estas pruebas son sueros recién extraídos y no bemolizados. También con heparina o EDTA.

Se recomienda un ayuno de 12 – 14 horas antes de la extracción, sobretodo si también se le va hacer determinación de triglicéridos a la misma muestra. Muestras que no cumplan este requisito no deben usarse para determinar colesterol y HDL-colesterol.

El colesterol en suero o plasma es estable por 5 días a temperatura ambiente, 2 semanas refrigerado y hasta 6 meses si se congela.

NOTA
El HDL-Colesterol no debe congelarse pero es estable hasta 5 días refrigerado.

Técnica para COLESTEROL


Reactivo Muestra Estándar
Muestra 1 ml 0.010 ml
Estándar 1 ml 0.010 ml
Reactivo Blanco 1 ml





A cada tubo (con reactivo colesterol) llevar a temperatura de reacción.
Incubar todos los tubos a 37 ºC por 5 minutos o 15 minutos a temperatura ambiente.
Después de incubar mezcle todos los reactivos por inversión, lea dentro de los 30 minutos siguientes.
Coloque el espectofotómetro a 500 nm lleve a 0 con Blanco Reactivo.
Anote absorbancia de muestra y estándar.



CALCULOS (COLESTEROL TOTAL)

Conc estándar/ Abs estándar * Abs Muestra = Concentración de la muestra (mg/dl)


Conc estándar: 200 mg/dl
Abs estándar: 0.153
Abs Muestra: 0.095
Concentración de la muestra: 124, 18 mg/dl

Valores normales:

Deseable: menos de 200 mg/dl
Limite alto: 200-239 mg/dl
Alto: 240 o por encima mg/dl

Se recomienda que niveles de colesterol por encima de 240 mg/dl deben ser evaluados por el fraccionamiento de las lipoproteínas. Específicamente la fracción LDL deberá determinarse así:

LDL= Colesterol Total – [Fracción HDL] – [Triglicérido]


LIMITACIONES DEL METODO

1) Niveles de ácido ascórbico por encima de 10 mg % (cuatro veces mayores que los observados después de una máxima ingestión) no interfieren en la prueba.
2) El presente método de colesterol ha demostrado ser lineal hasta 500 mg/dl . Más allá del límite, las muestras deberán diluirse con solución salina (0.85%) y ensayadas nuevamente. El nuevo resultado deberá multiplicarse por el factro de dilución.


Técnica para HDL- Colesterol

Precipitación de HDL

Mezclar 0,5 ml de muestra con 50 lambdas de reactivo precipitante. Meter en el freezer.
Centrifugar 10 minutos a 3500 – 4000 r.p.m.
Continuar de la siguiente manera:



Reactivo Muestra Estándar
Muestra 1 ml 0.05 ml
Estándar 1 ml 0.05 ml
Reactivo Blanco 1 ml


CALCULOS (HDL-COLESTEROL)

Conc estándar/ Abs estándar * Abs del sobrenadante * 1.1 = mg/dl


Conc estándar: 50 mg/dl
Abs estándar: 0.284
Abs del sobrenadante: 0.086

Concentración de la muestra: 16,654 mg/dl


Valores normales:

Hombres 30 – 70 mg/dl
Mujeres 35 – 85 m/dl


PERFIL LIPIDICO

Laboratorio de Bioquímica Clínica Grupo B
Paciente: Enidel Abad Sexo: Femenino

Edad: 24 años.

Trigliceridos: 112, 14 mg/dl
Colesterol total: 124, 18 mg/dl
HDL-colesterol: 16,65 mg/dl
Interpretación
Los valores de Triglicéridos y Colesterol total resultaron dentro del rango establecido como normal o deseable,mientras que el HDL- Colesterol está muy por debajo de los valores de referencia, podría inferirse algun error de tipo aleatorio (pipeteo, uso de reactivo, calidad de reactivo), lo que pudo ocasionar este resultado.